研究目的:本论文通过细胞实验和动物实验来研究富氢水对酒精诱导的肝损伤的保护作用。方法:在细胞学实验中,通过建立人正常肝细胞(hepatocyte cell lines,LO2)的酒精性损伤模型来研究富含氢气的细胞培养基(Hydrogen-rich Culture Medium,HCM)在体外对人肝细胞的保护作用。在动物实验中,我们使用ICR品系小鼠建立两种酒精诱导的肝损伤小鼠模型;通过大剂量、短时间给予小鼠50%(v/v)浓度的乙醇灌胃后构建急性酒精性肝损伤的小鼠模型来研究富氢生理盐水(Hydrogen-rich Saline,HS)对此类模型小鼠肝脏的保护作用;同时,为了进一步研究富氢生理盐水对小鼠慢性酒精性肝损伤的保护效果,我们使用同样品系的小鼠通过梯度地、长时间地灌胃50%(v/v)浓度乙醇的方式构建慢性酒精性肝损伤的小鼠模型。使用CCK-8细胞增殖检测试剂盒测定细胞增殖率并筛选出最佳的乙醇浓度来建立肝细胞的酒精性损伤模型;测定细胞增殖率和细胞内外的生化指标含量来综合比较不同处理组中细胞的损伤程度。具体地,在小鼠实验中,首先使用50%体积分数的乙醇以灌胃方式分别构建急性酒精性肝损伤小鼠模型和慢性酒精性肝损伤的小鼠模型,同时在两种建模的过程中给予各组小鼠不同的药物处理;然后使用各种生化检测试剂盒分别去测定小鼠血清中和小鼠肝脏组织中与肝功能相关的生化指标含量;最后制作苏木素-伊红(HE)染液染色的小鼠肝脏组织生理切片来观察小鼠肝脏结构的变化情况。结果:在细胞学实验中,CCK-8实验检测结果表明与乙醇组中的细胞相比,富氢培养基组中细胞的增殖率显著提高;同时生化试剂盒测定的细胞生化指标结果也证明富氢水能够显著改善由酒精损伤而导致的细胞内外生化指标含量的大幅度变动。在小鼠体内实验中,无论是在急性酒精性肝损伤小鼠模型还是慢性酒精性肝损伤小鼠模型中,我们都发现富氢水能够显著改善由于乙醇所导致的相关肝功能生化指标含量的上升或下降,并且小鼠肝脏组织的HE染色切片结果显示富氢生理盐水组中的小鼠肝脏结构基本保持正常形态。
结论:通过本课题研究,我们初步证明富氢培养基能够在体外提高肝脏细胞的增殖率,纠正肝脏细胞因酒精而导致的生化指标含量紊乱情况,在小鼠体内实验中,富氢生理盐水既稳定了两种损伤模型小鼠相关肝功能指标含量也较好地保护了小鼠肝脏组织结构不受酒精的损伤。所以,综合上述实验结果,本研究初步证明了富氢水对酒精诱导的肝损伤有较好的保护效果。
