氢气曾经被认为是惰性气体,对人和动物没有生理和药理学作用,但是这一概念已经被推翻,研究发现氢气具有非常好的生物学效应,能调节多种氧化应激相关疾病。有大量动物疾病模型和人体试验都先后证明,氢气在预防和调节疾病方面可能具有非常强的应用前景。但是至今对氢气抗损伤的细节和分子机制仍然存在不清楚不完善的问题。本研究主要研究氢气对自由基诱导的细胞毒性保护作用,采用叔丁基氢过氧化物(TBHP)处理人类急性单核细胞的白血病细胞株THP-1。TBHP是一类有机过氧化物,是一种稳定的诱导自由基的化学物质,本研究作为细胞自由基损伤的诱导物质。细胞损伤细胞膜通透性增加,导致细胞内乳酸脱氢酶释放。Hoechst33342/PI细胞凋亡染色试剂盒。Hoechst33258能被活细胞摄取,与DNA结合,在紫外线下呈蓝色荧光。PI则能跨膜扩散到坏死细胞内,使死细胞着色产生红色荧光。在散点图上结果为:正常细胞呈低蓝/红光,凋亡细胞呈高蓝/低红光,坏死细胞呈低蓝/高红光。使用C11-BODIPY和alamarBlue两种荧光染料,分别分析脂肪酸过氧化反应和线粒体活力测定。线粒体膜电位使用四甲基罗丹明甲酯(TMRM) 检测。
研究结果发现,氢气对TBHP导致细胞毒性反应有保护作用,氢气抑制细胞脂肪酸过氧化,降低细胞膜渗透率。氢气也能缓解线粒体氧化还原酶活性和线粒体膜电下降。PI染色显示氢气能避免细胞死亡。
研究结果提示,氢气能通过减少自由基诱导的脂肪酸过氧化,避免细胞死亡和线粒体功能障碍。